کشت سلولی
پاساژ و دوبلشدن جمعیت
رشد واقعی کشت را دنبال میکند، نه صرفاً تعداد دفعات پاساژ. از عدد کشت و برداشت، دوبلشدن جمعیت، زمان دوبلشدن و سطح دوبلشدن تجمعی میدهد؛ و از نسبت پاساژ، دوبلشدن را وقتی نشمردهاید تخمین میزند.
دوبلشدن جمعیت برابر log₂ افزایش از کشت تا برداشت است. زمان دوبلشدن یعنی زمان کشت تقسیم بر تعداد دوبلشدن. PDL تجمعی مجموع در طول پاساژهاست و سند صادقانهٔ سن یک رده است — نسبت پاساژ بهتنهایی نیست، چون میزان بازرشد سلولها پیش از برداشت فرق میکند.
از نسبت پاساژ
وقتی سلولها با نسبت ثابت پاساژ داده و هر بار تا همان تراکم بازرشد کنند، دوبلشدن هر پاساژ برابر log₂ نسبت است: پاساژ ۱:۸ برابر سه دوبلشدن. این کار، دوبلشدن تجمعی را از نسبت و تعداد پاساژ تخمین میزند وقتی عدد دقیق کشت و برداشت ثبت نشده باشد.
فرمول
دوبلشدن جمعیت = log₂(برداشت ÷ کشت)؛ زمان دوبلشدن = زمان کشت ÷ دوبلشدن
- کشت
- سلولهای گذاشتهشده در آغاز پاساژ
- برداشت
- سلولهای بازیافته در پایان
- PDL تجمعی
- مجموع نرخِ دوبلشدن در طول عمر رده
- از نسبت
- دوبلشدن هر پاساژ = log₂(نسبت پاساژ)، با فرض بازرشد کامل هر بار
مثال حلشده
کشت ۵×۱۰⁵ و برداشت ۴×۱۰⁶ پس از ۷۲ ساعت
- کشت ۵۰۰٬۰۰۰
- برداشت ۴٬۰۰۰٬۰۰۰
- زمان ۷۲ ساعت
- افزایش چندبرابری: ۴٬۰۰۰٬۰۰۰ بر ۵۰۰٬۰۰۰ برابر ۸.
- دوبلشدن: log₂ از ۸ برابر ۳.
- زمان دوبلشدن: ۷۲ ساعت بر ۳ برابر ۲۴ ساعت.
پاسخ ۳ دوبلشدن، زمان دوبلشدن ۲۴ ساعت
خطاهای رایج
- ثبت شمارهٔ پاساژ انگار سن را میسنجد. دو آزمایشگاه در پاساژ ۲۰ میتوانند دهها دوبلشدن فاصله داشته باشند؛ PDL تجمعی عددی است که منتقل میشود.
- خواندن زمان دوبلشدن از دو برداشتِ روزها فاصلهدار. رشد در طول پاساژ یکنواخت نیست؛ فاز نمایی نرخ صادق را میدهد، فلات نه.
- قاطیکردن ساعت و روز. زمان کشت را با یک واحد وارد کنید و زمان دوبلشدن را با همان بخوانید.
پرسشهای متداول
نسبت پاساژ یا شمارش دقیق؟
شمارش بهتر است چون بازرشد فرق میکند. مسیر نسبت، تخمین معقولی برای بازهای از تاریخ است که فقط نحوهٔ پاساژ را ثبت کردهاید.
چرا PDL تجمعی مهم است؟
بسیاری ردهها پس از سطح دوبلشدن معیّن دریفت یا پیر میشوند. ثبت PDL اجازه میدهد رده را در سنی مشخص بازنشسته کنید و کار را تکرارپذیر میکند.
اگر برداشت زیر کشت باشد چه؟
آنگاه رشد خالصی نبوده و زمان دوبلشدن وجود ندارد؛ بهجای تحمیل عدد، دنبال مشکل پلیتینگ یا زندهمانی بگردید.