Culture cellulaire
Configuration de transfection
Met à l’échelle une transfection à partir d’une quantité d’ADN par puits et d’un ratio réactif/ADN sur toute une plaque, avec une marge pour que le mélange maître couvre les pertes de pipetage. L’outil fait le calcul ; la quantité d’ADN et le ratio doivent venir du protocole de votre réactif et de votre optimisation.
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Mélange maître
| Composant | Par puits | Total avec marge |
|---|
Le ratio et la quantité d’ADN dépendent entièrement de votre réactif et de votre lignée cellulaire — prenez-les dans le protocole du réactif. Cet outil fait le calcul ; il ne connaît pas les bonnes valeurs pour votre expérience.
L’ADN par puits est saisi directement ou déduit d’une quantité par centimètre carré multipliée par la surface de croissance du récipient. Le volume de réactif est l’ADN multiplié par le ratio saisi. Les totaux intègrent la marge afin que le mélange maître couvre les pertes de pipetage sur tous les puits. Le milieu à sérum réduit pour la formation du complexe est facultatif et se met à l’échelle de la même façon.
Formule
réactif par puits = ADN par puits × ratio ; total = par puits × puits × (1 + marge)
- ADN par puits
- saisi directement, ou en quantité par cm² multipliée par la surface de croissance du récipient
- ratio
- microlitres de réactif par microgramme d’ADN, d’après la fiche du réactif
- marge
- un pourcentage ajouté pour que le mélange ne manque pas sur tous les puits
Exemple résolu
Un demi-microgramme par puits à un ratio 3:1 sur 24 puits
- 0,5 µg d’ADN par puits
- ratio 3 µl/µg
- 24 puits, marge de 10 pour cent
- Réactif par puits : 0,5 fois 3 donne 1,5 µl.
- Facteur de travail : 24 fois 1,10 donne 26,4 équivalents-puits.
- Totaux : 13,2 µg d’ADN et 39,6 µl de réactif.
Réponse 1,5 µl de réactif par puits ; 13,2 µg et 39,6 µl pour la plaque
Erreurs courantes
- Emprunter un ratio à un autre réactif. Réactifs lipidiques, PEI et autres diffèrent d’un facteur plusieurs ; le bon ratio est celui de la fiche de votre produit, affiné pour vos cellules.
- Sauter la marge sur les petits puits. Volume mort et rétention en pointe frappent le plus à l’échelle 96 puits ; sans marge, les derniers puits manquent.
- Oublier que la confluence pilote l’efficacité. Le calculateur dimensionne le mélange, pas la biologie ; ensemencez à la densité que suppose votre protocole.
Questions fréquentes
Microgrammes par puits ou nanogrammes par cm² ?
Par puits est commode pour les plaques standard. Par cm² voyage mieux entre formats de récipient, car cela suit automatiquement la surface de croissance.
Cela couvre-t-il le PEI par ratio azote/phosphate ?
Non. Il utilise le ratio volume/masse dont relèvent les réactifs lipidiques et bien des polymères. Un calcul N:P demande d’autres entrées et sort du cadre ici.
Quelle marge prendre ?
Dix pour cent est un point de départ courant ; plus haut pour beaucoup de petits puits ou une étape multicanal, plus bas pour quelques grands.