Белки
Выход белка
Превращает концентрацию и объём в общий белок, затем отслеживает, сколько удержано. Задайте исходное количество для процента выхода на этапе очистки или объём культуры для выхода на литр, чтобы сравнивать экспрессию между запусками.
Выход и продуктивность
Общий белок — это концентрация, умноженная на объём. Выход сравнивает его с количеством, с которого вы начали этап, отслеживая потери при очистке. Выход на литр делит общий белок на объём культуры, давая показатель экспрессии, сравнимый между запусками.
Формула
всего = концентрация × объём; выход = всего ÷ исходное × 100
- концентрация
- концентрация белка фракции, мг/мл
- объём
- объём фракции, мл
- исходный белок
- количество, с которого начали этап, для выхода
- объём культуры
- объём культуры экспрессии, для выхода на литр
Разобранный пример
2,5 мг/мл в 4 мл
- концентрация 2,5 мг/мл
- объём 4 мл
- исходное 20 мг
- Всего: 2,5 × 4 — это 10 мг.
- Выход: 10 ÷ 20 — это 50 процентов.
Ответ 10 мг белка, выход 50 процентов
Частые ошибки
- Измерять концентрацию и исходное количество разными методами. Брэдфорд здесь и BCA там несопоставимы; выход имеет смысл лишь при одном методе.
- Считать выход выше 100 процентов реальной прибавкой. Обычно это несоответствие метода или разведения либо мешающие вещества, а не больше белка, чем было.
- Сравнивать выход на литр между разными хозяевами или средами без пометок. Показатель сопоставим только внутри одной системы экспрессии.
Частые вопросы
Как получить концентрацию?
Из показания A280 с коэффициентом экстинкции или колориметрического анализа по калибровочной кривой. Инструменты a280 и калибровочной кривой оба её дают.
Это степень очистки?
Нет. Степень очистки требует удельной активности — активности на миллиграмм. Этот инструмент отслеживает общий белок и выход, а не активность.
Какой выход хороший?
Полностью зависит от этапа и белка; универсальной цели нет. Отслеживайте его по этапам, чтобы найти, где теряется материал.