کشت سلولی
رنگآمیزی فلوسایتومتری
مقادیر آمادهسازی یک ران رنگآمیزی را درمیآورد: کل سلول و بافر برای مجموعهای از لولهها، آنتیبادی هر تست از تیترش، کل کوکتل، و مدت اکتساب. اینها مقدارند، نه پروتکل؛ پنل و تیترها از اعتبارسنجی خودتان میآید.
آنتیبادی هر تست
از روی رقت، آنتیبادی هر تست برابر حجم رنگآمیزی تقسیم بر ضریب رقت است. از روی جرم در هر تست، برابر آن جرم تقسیم بر غلظت استوک است. کل، تعداد لوله و مقدار اضافه را حمل میکند تا کوکتل همهٔ لولهها را بپوشاند. تیتر برای هر لات آنتیبادی خاص است — بهجای فرض، با تیتراسیون تعیینش کنید.
زمان اکتساب
اینها مقادیر آمادهسازیاند، نه پروتکل رنگآمیزی. سلول هر لوله، حجم رنگآمیزی و تیتر از پنل و اعتبارسنجی شما میآید؛ ابزار آنها را به تعداد لوله مقیاس میزند و مقدار اضافهٔ تعیینشده را میافزاید. زمان اکتساب صرفاً رویداد هدف تقسیم بر نرخ رویداد است.
فرمول
آنتیبادی هر تست = حجم رنگآمیزی ÷ رقت (یا جرم هر تست ÷ غلظت استوک)
- سلول هر لوله
- تعدادی که در هر لوله رنگآمیزی و اکتساب میکنید
- حجم رنگآمیزی
- حجمی که آنتیبادی در هر لوله به آن افزوده میشود
- تیتر
- بهصورت رقت ۱:X، یا جرم هر تست در برابر غلظت استوک
- اضافه
- حاشیهای تا کوکتل مشترک همهٔ لولهها را بپوشاند
مثال حلشده
آنتیبادی ۱:۲۰۰ روی ۱۲ لوله در ۱۰۰ میکرولیتر
- ۱×۱۰⁶ سلول هر لوله
- ۱۲ لوله، ۱۰ درصد اضافه
- ۱۰۰ میکرولیتر رنگآمیزی، تیتر ۱:۲۰۰
- آنتیبادی هر تست: ۱۰۰ بر ۲۰۰ برابر ۰٫۵ میکرولیتر.
- ضریب کاری: ۱۲ ضربدر ۱٫۱۰ برابر ۱۳٫۲ تست.
- کل آنتیبادی: ۰٫۵ ضربدر ۱۳٫۲ برابر ۶٫۶ میکرولیتر.
پاسخ ۰٫۵ میکرولیتر هر تست، ۶٫۶ میکرولیتر آنتیبادی برای کوکتل
خطاهای رایج
- استفاده از رقت پیشنهادی سازنده بهعنوان تیتر. مقدار بهینه برای هر لات و هر دستگاه است؛ بهجای اعتماد به برچسب، تا بهترین نسبت سیگنالبهزمینه تیتر کنید.
- اندازهزدن کوکتل بدون اضافه. کوکتل بیشترین معرف را میبرد و به هر لوله و نوک حجم میبازد؛ حاشیه مانع جاماندن آنتیبادی در لولهٔ آخر میشود.
- رنگآمیزی با تعداد سلول نادرست. سلول زیاد بهازای مقدار ثابت آنتیبادی تیتر مؤثر را افت میدهد؛ سلول هر لوله را با شرایط تیتراسیون هماهنگ نگه دارید.
پرسشهای متداول
رقت یا جرم هر تست؟
هرکدام که تیتراسیون شما داد. رقت وقتی استوک ثابت است سریع است؛ جرم هر تست وقتی استوک بین لاتها فرق میکند روشنتر است.
آیا زمان اکتساب دقیق است؟
رویداد هدف بر نرخ رویداد است، پس فقط بهاندازهٔ نرخ تخمینی شما دقیق است. جمعیتهای نادر و گرفتگی زمان واقعی را بیشتر میکنند.
آیا این جبرانسازی را طراحی میکند؟
نه. مقادیر یک رنگآمیزی را مدیریت میکند؛ کنترلها و جبرانسازی بخش جداگانهای از برپایی آزمایشاند.