Culture cellulaire
Marquage en cytométrie en flux
Calcule les quantités de préparation d’une série de marquage : cellules et tampon totaux pour un jeu de tubes, anticorps par test selon son titre, total du cocktail et durée d’acquisition. Ce sont des quantités, non un protocole ; le panel et les titres viennent de votre propre validation.
Anticorps par test
À partir d’une dilution, l’anticorps par test est le volume de marquage divisé par le facteur. À partir d’une masse par test, c’est cette masse divisée par la concentration de la solution mère. Le total intègre le nombre de tubes et la marge pour qu’un cocktail couvre chaque tube. Les titres sont propres à chaque lot d’anticorps — déterminez-les par titrage plutôt que de les supposer.
Temps d’acquisition
Ce sont des quantités de préparation, non des protocoles de marquage. Les cellules par tube, le volume de marquage et le titre proviennent de votre panel et de votre validation ; l’outil les met à l’échelle du nombre de tubes et ajoute la marge définie. Le temps d’acquisition est simplement les événements cibles divisés par le débit d’événements.
Formule
anticorps par test = volume de marquage ÷ dilution (ou masse par test ÷ concentration mère)
- cellules par tube
- le nombre que vous marquez et acquérez par tube
- volume de marquage
- le volume dans lequel l’anticorps est ajouté par tube
- titre
- donné en dilution 1:X ou en masse par test face à une concentration mère
- marge
- un jeu pour qu’un cocktail commun couvre chaque tube
Exemple résolu
Un anticorps 1:200 sur 12 tubes dans 100 µl
- 1 × 10⁶ cellules par tube
- 12 tubes, marge de 10 pour cent
- 100 µl de marquage, titre 1:200
- Anticorps par test : 100 sur 200 donne 0,5 µl.
- Facteur de travail : 12 fois 1,10 donne 13,2 tests.
- Anticorps total : 0,5 fois 13,2 donne 6,6 µl.
Réponse 0,5 µl par test, 6,6 µl d’anticorps pour le cocktail
Erreurs courantes
- Prendre la dilution conseillée par le fournisseur pour un titre. La quantité optimale est par lot et par appareil ; titrez jusqu’au meilleur rapport signal/bruit plutôt que de vous fier à l’étiquette.
- Dimensionner un cocktail sans marge. Le cocktail coûte le plus de réactif et perd du volume à chaque tube et pointe ; une marge évite que le dernier tube manque un anticorps.
- Marquer au mauvais nombre de cellules. Trop de cellules pour une quantité fixe d’anticorps baisse le titre effectif ; gardez les cellules par tube cohérentes avec votre titrage.
Questions fréquentes
Dilution ou masse par test ?
Ce que votre titrage a produit. Une dilution est rapide quand le stock est fixe ; une masse par test est plus claire quand les stocks varient entre lots.
Le temps d’acquisition est-il exact ?
C’est les événements cibles sur le débit d’événements, donc pas meilleur que votre débit estimé. Populations rares et bouchages allongent le temps réel.
Cela conçoit-il la compensation ?
Non. L’outil gère les quantités d’un marquage ; contrôles et compensation sont une partie distincte de la mise en place.