Клеточная культура
Окрашивание для проточной цитометрии
Рассчитывает количества для подготовки окрашивания: всего клеток и буфера на набор пробирок, антитело на тест по титру, итог коктейля и время сбора. Это количества, а не протокол; панель и титры берутся из вашей валидации.
Антитело на тест
По разведению антитело на тест — это объём окрашивания, делённый на кратность. По массе на тест — это масса, делённая на концентрацию исходного раствора. Итог несёт число пробирок и запас, чтобы коктейля хватило на все пробирки. Титры специфичны для каждой партии антитела — определяйте их титрованием, а не предположением.
Время сбора
Это количества для подготовки, а не протоколы окрашивания. Клетки на пробирку, объём окрашивания и титр берутся из вашей панели и валидации; инструмент масштабирует их на число пробирок и добавляет заданный запас. Время сбора — это просто целевые события, делённые на скорость событий.
Формула
антитело на тест = объём окрашивания ÷ разведение (или масса на тест ÷ концентрация исходного)
- клеток на пробирку
- число, которое вы окрашиваете и собираете на пробирку
- объём окрашивания
- объём, в который добавляется антитело на пробирку
- титр
- задан как разведение 1:X или как масса на тест против концентрации исходного
- запас
- поле, чтобы общий коктейль покрыл каждую пробирку
Разобранный пример
Антитело 1:200 на 12 пробирок в 100 мкл
- 1 × 10⁶ клеток на пробирку
- 12 пробирок, запас 10 процентов
- 100 мкл окрашивания, титр 1:200
- Антитело на тест: 100 на 200 — это 0,5 мкл.
- Рабочий множитель: 12 умножить на 1,10 — это 13,2 теста.
- Всего антитела: 0,5 умножить на 13,2 — это 6,6 мкл.
Ответ 0,5 мкл на тест, 6,6 мкл антитела на коктейль
Частые ошибки
- Брать рекомендованное производителем разведение за титр. Оптимальное количество — на партию и на прибор; титруйте до лучшего отношения сигнал-фон, а не доверяйте этикетке.
- Размерять коктейль без запаса. Коктейль расходует больше всего реагента и теряет объём на каждую пробирку и наконечник; поле не даёт последней пробирке остаться без антитела.
- Окрашивать при неверном числе клеток. Слишком много клеток на фиксированное антитело снижает эффективный титр; держите число клеток на пробирку как при титровании.
Частые вопросы
Разведение или масса на тест?
То, что дало ваше титрование. Разведение быстрее при фиксированном исходном; масса на тест яснее, когда исходные растворы различаются между партиями.
Точно ли время сбора?
Это целевые события на скорость событий, так что оно не точнее вашей оценки скорости. Редкие популяции и засоры удлиняют реальное время.
Проектирует ли это компенсацию?
Нет. Инструмент ведёт количества окрашивания; контроли и компенсация — отдельная часть постановки эксперимента.