Culture cellulaire
Comptage cellulaire
Transforme un comptage en hématimètre en concentration et en total, et indique quel volume de suspension prélever pour un nombre donné de cellules. Si votre compteur donne déjà une concentration, passez au second mode et sautez l’arithmétique de la grille.
Total et volume à prélever
Le total est la concentration multipliée par le volume saisi. La dernière valeur indique quel volume de cette suspension prélever pour obtenir le nombre cible de cellules.
Le facteur 10⁴ est fixé par la chambre de Neubauer standard, où chaque grand carré d’angle contient 0,1 microlitre. Le facteur de dilution est la dilution de l’échantillon avant chargement : 2 pour un mélange 1:1 avec le bleu trypan. Comptez plusieurs carrés et faites la moyenne ; plus on compte de cellules, plus l’erreur de comptage est faible.
Formule
concentration = (cellules comptées ÷ carrés comptés) × facteur de dilution × 10⁴
- cellules comptées
- le total compté sur les grands carrés que vous avez évalués
- carrés comptés
- combien de grands carrés d’angle vous avez comptés, en général quatre
- facteur de dilution
- la dilution avant chargement ; 2 pour un mélange 1:1 au bleu trypan
- 10⁴
- fixé par la chambre : chaque grand carré contient 0,1 microlitre, et il y en a 10⁴ dans un millilitre
Exemple résolu
Un comptage sur quatre carrés avec un mélange 1:1
- 180 cellules sur 4 carrés
- facteur de dilution 2
- volume de suspension 10 ml
- Moyenne par carré : 180 divisé par 4 donne 45.
- Concentration : 45 fois 2 fois 10⁴ donne 9 × 10⁵ cellules par ml.
- Total : 9 × 10⁵ fois 10 ml donne 9 × 10⁶ cellules.
Réponse 9 × 10⁵ cellules par ml, 9 × 10⁶ au total
Erreurs courantes
- Oublier le facteur de dilution. Si vous avez mélangé une part de cellules et une part de bleu trypan, l’échantillon est dilué deux fois ; laisser le facteur à 1 divise le compte par deux.
- Compter trop peu de cellules. Sous une dizaine par carré, le hasard domine ; comptez plus de carrés ou un échantillon plus dense pour que le total atteigne les centaines.
- Compter un amas comme une seule cellule. Trypsinez d’abord jusqu’à une suspension unicellulaire, sinon la concentration est sous-estimée et la viabilité faussée.
Questions fréquentes
Quelles cellules limites compter ?
Choisissez deux côtés de chaque carré, disons le haut et la gauche, comptez les cellules qui les touchent et ignorez les deux autres. Appliqué uniformément, cela évite de compter deux fois une même cellule.
Le facteur 10⁴ change-t-il ?
Seulement si votre chambre n’a pas la profondeur standard de 0,1 mm. Pour une chambre de Neubauer améliorée ordinaire, il est fixe. Une autre chambre a son propre facteur.
Pourquoi moyenner plusieurs carrés ?
Les cellules sédimentent inégalement. Moyenner quatre coins et, idéalement, refaire le remplissage lisse l’erreur de pipetage et de répartition.