Culture cellulaire
Viabilité au bleu trypan
À partir des comptages de vivantes et de mortes au bleu trypan, donne le pourcentage de viabilité, la concentration en cellules vivantes, mortes et totales, et le volume de suspension pour un nombre cible de cellules vivantes. Les cellules mortes captent le colorant et paraissent bleues ; les vivantes l’excluent et restent claires.
Rendement en cellules vivantes
La viabilité est le nombre de cellules vivantes rapporté au total. Les concentrations utilisent la même arithmétique d’hématimètre que l’outil de comptage : moyenne de cellules par carré multipliée par le facteur de dilution et par 10⁴. Il n’existe pas de viabilité minimale universelle — l’acceptabilité dépend de la lignée et de l’usage en aval — l’outil rapporte donc la valeur sans la juger. Lisez la chambre dans les minutes suivant l’ajout du bleu trypan : une exposition prolongée tue les cellules et abaisse la viabilité apparente.
Formule
viabilité = vivantes ÷ (vivantes + mortes) × 100
- vivantes
- cellules claires, non colorées, comptées
- mortes
- cellules bleues, remplies de colorant, comptées
- concentration en vivantes
- (vivantes ÷ carrés) × facteur de dilution × 10⁴
Exemple résolu
Un comptage de 184 claires et 16 bleues
- 184 vivantes, 16 mortes sur 4 carrés
- facteur de dilution 2
- volume de suspension 10 ml
- Viabilité : 184 sur 200 donne 92 pour cent.
- Concentration en vivantes : 184 sur 4, fois 2, fois 10⁴, donne 9,2 × 10⁵ par ml.
- Total de vivantes dans 10 ml : 9,2 × 10⁶.
Réponse 92 pour cent viables, 9,2 × 10⁵ cellules vivantes par ml
Erreurs courantes
- Laisser les cellules trop longtemps dans le bleu trypan. Le colorant est toxique ; lisez en quelques minutes, sinon la viabilité baisse pour des raisons sans rapport avec votre traitement.
- Traiter un pourcentage fixe comme un succès ou un échec. L’acceptable dépend de la lignée et du test à venir ; un isolat primaire et une lignée robuste ne partagent pas un seuil.
- Noter les cellules pâles de façon variable. Décidez avant de commencer si une cellule pâle est vivante ou morte, et appliquez-le pareil à chaque carré et chaque échantillon.
Questions fréquentes
Le bleu trypan est-il fiable en bas de gamme ?
Il reflète l’intégrité membranaire, non la santé métabolique, et sous-estime l’apoptose précoce. Pour une viabilité défendable, confirmez par une seconde méthode.
Faut-il compter les mortes pour l’ensemencement ?
Non. Ensemencez sur la concentration en vivantes ; c’est pourquoi l’outil l’isole et calcule le volume à partir des vivantes plutôt que du total.
Pourquoi la concentration totale a-t-elle chuté après traitement ?
Les cellules mortes se lysent et disparaissent : un traitement sévère peut baisser à la fois la viabilité et le compte total. Comparez à un témoin compté de la même façon.