Клеточная культура
Подсчёт клеток
Превращает подсчёт в камере Горяева в концентрацию и общее число и подсказывает, сколько суспензии взять для нужного числа клеток. Если счётчик уже даёт концентрацию, переключитесь во второй режим и пропустите арифметику сетки.
Всего и требуемый объём
Всего клеток — это концентрация, умноженная на введённый объём. Последнее значение показывает, сколько суспензии отобрать, чтобы получить целевое число клеток.
Коэффициент 10⁴ задан стандартной камерой Нойбауэра, где каждый большой угловой квадрат вмещает 0,1 микролитра. Коэффициент разведения — это кратность разведения образца перед загрузкой: 2 для смеси 1:1 с трипановым синим. Считайте несколько квадратов и усредняйте; чем больше подсчитано клеток, тем меньше ошибка подсчёта.
Формула
концентрация = (подсчитано клеток ÷ подсчитано квадратов) × коэффициент разведения × 10⁴
- подсчитано клеток
- сумма по большим квадратам, которые вы оценили
- подсчитано квадратов
- сколько больших угловых квадратов посчитано, обычно четыре
- коэффициент разведения
- кратность разведения перед загрузкой; 2 для смеси 1:1 с трипановым синим
- 10⁴
- задан камерой: каждый большой квадрат вмещает 0,1 мкл, а в миллилитре их 10⁴
Разобранный пример
Подсчёт по четырём квадратам со смесью 1:1
- 180 клеток в 4 квадратах
- коэффициент разведения 2
- объём суспензии 10 мл
- Среднее на квадрат: 180 делить на 4 — это 45.
- Концентрация: 45 умножить на 2 умножить на 10⁴ — это 9 × 10⁵ клеток на мл.
- Всего: 9 × 10⁵ умножить на 10 мл — это 9 × 10⁶ клеток.
Ответ 9 × 10⁵ клеток на мл, 9 × 10⁶ всего
Частые ошибки
- Забыть коэффициент разведения. Если смешали одну часть клеток с одной частью трипанового синего, образец разведён вдвое; коэффициент 1 вдвое занижает счёт.
- Считать слишком мало клеток. Ниже примерно десяти на квадрат счёт правит случай; считайте больше квадратов или более плотный образец, чтобы итог шёл на сотни.
- Считать сгусток за одну клетку. Сначала трипсинизируйте до односуспензии, иначе концентрация занижается, а жизнеспособность искажается.
Частые вопросы
Какие граничные клетки считать?
Выберите две стороны каждого квадрата, скажем верх и лево, считайте клетки на них, а две другие игнорируйте. При единообразии это исключает двойной счёт.
Меняется ли коэффициент 10⁴?
Только если у камеры не стандартная глубина 0,1 мм. Для обычной улучшенной камеры Нойбауэра он фиксирован. У другой камеры — свой коэффициент.
Зачем усреднять несколько квадратов?
Клетки оседают неравномерно. Усреднение четырёх углов и, в идеале, повторная загрузка сглаживают ошибку пипетирования и распределения.