تحلیل داده
سنجش زندهمانی MTT
خوانش جذب MTT را به درصد زندهمانی در برابر کنترل تبدیل میکند، با میانگین و پراکندگی هر گروه. برای سری غلظتی، IC50 را از نقاطی که ۵۰ درصد را در بر میگیرند درونیابی میکند. بلانک را وارد کنید تا زمینهٔ رنگ و پلیت حذف شود.
هر خط یک گروه: یک برچسب (یا یک غلظت در حالت سری)، سپس یک یا چند تکرار جذب که با ویرگول جدا شدهاند. در حالت سری، ردیف با غلظت ۰ همان کنترل است.
مقدار IC50 روی مقیاس لگاریتمی بین دو غلظتی که زندهمانی ۵۰ درصد را در بر میگیرند درونیابی میشود. این خواندنی از روی نقاط شماست، نه برازش منحنی دوز-پاسخ، و تنها وقتی ظاهر میشود که زندهمانی در بازهٔ آزمودهشده واقعاً از ۵۰ درصد عبور کند.
زندهمانی هر گروه برابر جذبِ بلانککمشده تقسیم بر جذبِ بلانککمشدهٔ کنترل، بهصورت درصد است. تکرارها یک میانگین و یک انحراف معیار میدهند. بلانک، جذب محیطبهاضافهٔمعرف بدون سلول است؛ کمکردنش زمینهای را که رنگ و پلیت میسازند حذف میکند.
فرمول
زندهمانی = (نمونه − بلانک) ÷ (کنترل − بلانک) × ۱۰۰
- نمونه
- میانگین جذب گروه تیمارشده
- کنترل
- مرجع بدونتیمار، بهعنوان ۱۰۰ درصد
- بلانک
- محیط بهاضافهٔ معرف، بدون سلول؛ زمینهای که کم میشود
- IC50
- روی مقیاس لگاریتمی بین دو دوزی که ۵۰ درصد را احاطه میکنند درونیابیشده
مثال حلشده
یک گروه تیمارشده در برابر کنترل بدونتیمار
- میانگین کنترل ۱٫۰۰
- میانگین تیمار ۰٫۵۲۵
- بلانک ۰٫۰۵
- کمکردن بلانک: ۰٫۵۲۵ منهای ۰٫۰۵ برابر ۰٫۴۷۵؛ ۱٫۰۰ منهای ۰٫۰۵ برابر ۰٫۹۵.
- تقسیم: ۰٫۴۷۵ بر ۰٫۹۵ برابر ۰٫۵۰.
- بهصورت درصد: ۵۰.
پاسخ زندهمانی ۵۰ درصد نسبت به کنترل
خطاهای رایج
- گذشتن از بلانک. فورمازان روی زمینهای از محیط، فنولرد و پلیت مینشیند؛ بدون کمکردنش، چاهکهای کمسیگنال زیادی بالا خوانده میشوند.
- خواندن IC50 از منحنیای که هرگز به نیمه نمیرسد. اگر زندهمانی در بازهٔ شما بالای پنجاه بماند، IC50ای برای درونیابی نیست؛ بهجای برونیابی، دوزها را گسترش دهید.
- مقایسهٔ پلیتهای خواندهشده در زمان یا طولموج متفاوت. تشکیل فورمازان و طولموج خوانش هر دو مقادیر مطلق را جابهجا میکنند؛ روی هر پلیت یک کنترل نگه دارید.
پرسشهای متداول
آیا IC50 برازش منحنی است؟
نه. درونیابی مستقیم بین دو نقطهٔ احاطهکننده روی مقیاس لگاریتمی دوز است. برای مقدار درخور انتشار، مدل چهارپارامتری را به همهٔ نقاط برازش دهید.
چند تکرار؟
بهقدری که پراکندگی دیده شود؛ سه چاهک فنی هر گروه حداقل رایجی است و ابزار انحراف معیار را گزارش میکند تا داوری کنید.
برای دیگر سنجشهای تترازولیوم هم بهکار میرود؟
بله. MTS، XTT و WST همان حساب جذببهزندهمانی را دارند؛ تنها هندلینگ معرف فرق میکند.