Analyse
Test de viabilité MTT
Transforme les lectures d’absorbance MTT en pourcentage de viabilité face à un témoin, avec une moyenne et une dispersion par groupe. Pour une série de concentrations, interpole une CI50 à partir des points qui encadrent cinquante pour cent. Saisissez le blanc pour retirer le fond du colorant et de la plaque.
Un groupe par ligne : une étiquette (ou une concentration en mode série), puis un ou plusieurs réplicats d’absorbance séparés par des virgules. En mode série, la ligne de concentration 0 est le témoin.
La CI50 est interpolée sur une échelle logarithmique entre les deux concentrations qui encadrent 50 % de viabilité. C’est une lecture sur vos points, non l’ajustement d’une courbe dose-réponse, et elle n’apparaît que lorsque la viabilité franchit réellement 50 % dans l’intervalle testé.
La viabilité par groupe est l’absorbance corrigée du blanc rapportée à l’absorbance du témoin corrigée du blanc, en pourcentage. Les réplicats donnent une moyenne et un écart-type. Le blanc est l’absorbance du milieu additionné du réactif sans cellules ; le soustraire retire le fond apporté par le colorant et la plaque.
Formule
viabilité = (échantillon − blanc) ÷ (témoin − blanc) × 100
- échantillon
- l’absorbance moyenne du groupe traité
- témoin
- la référence non traitée, prise à 100 pour cent
- blanc
- milieu plus réactif, sans cellules ; le fond à soustraire
- CI50
- interpolée en échelle logarithmique entre les deux doses encadrant 50 pour cent
Exemple résolu
Un groupe traité face à un témoin non traité
- moyenne du témoin 1,00
- moyenne du traité 0,525
- blanc 0,05
- Soustraire le blanc : 0,525 moins 0,05 donne 0,475 ; 1,00 moins 0,05 donne 0,95.
- Diviser : 0,475 sur 0,95 donne 0,50.
- En pourcentage : 50.
Réponse 50 pour cent de viabilité par rapport au témoin
Erreurs courantes
- Sauter le blanc. Le formazan repose sur un fond dû au milieu, au rouge de phénol et à la plaque ; sans le soustraire, les puits à faible signal se lisent trop haut.
- Lire une CI50 sur une courbe qui n’atteint jamais la moitié. Si la viabilité reste au-dessus de cinquante sur toute la gamme, il n’y a pas de CI50 à interpoler ; étendez les doses au lieu d’extrapoler.
- Comparer des plaques lues à des moments ou longueurs d’onde différents. Le développement du formazan et la longueur d’onde décalent les valeurs absolues ; gardez un témoin sur chaque plaque.
Questions fréquentes
La CI50 est-elle un ajustement de courbe ?
Non. C’est une interpolation directe entre les deux points encadrants sur une échelle log-dose. Pour une valeur publiable, ajustez un modèle à quatre paramètres sur tous les points.
Combien de réplicats ?
Assez pour voir la dispersion ; trois puits techniques par groupe est un minimum courant, et l’outil rapporte l’écart-type pour en juger.
Utilisable pour d’autres tests au tétrazolium ?
Oui. MTS, XTT et WST partagent la même arithmétique absorbance-viabilité ; seule la manipulation du réactif diffère.