Анализ
MTT-тест жизнеспособности
Превращает показания поглощения MTT в процент жизнеспособности относительно контроля со средним и разбросом по группе. Для серии концентраций интерполирует IC50 по точкам, охватывающим пятьдесят процентов. Введите бланк, чтобы убрать фон красителя и планшета.
По одной группе на строку: метка (или концентрация в режиме серии), затем одна или несколько повторностей поглощения через запятую. В режиме серии строка с концентрацией 0 — это контроль.
IC50 интерполируется по логарифмической шкале между двумя концентрациями, охватывающими 50 % жизнеспособности. Это считывание по вашим точкам, а не подгонка кривой доза-эффект, и появляется, только когда жизнеспособность действительно пересекает 50 % в испытанном диапазоне.
Жизнеспособность группы — это поглощение за вычетом бланка, делённое на поглощение контроля за вычетом бланка, в процентах. Повторности дают среднее и стандартное отклонение. Бланк — это поглощение среды с реагентом без клеток; его вычитание убирает фон, вносимый красителем и планшетом.
Формула
жизнеспособность = (образец − бланк) ÷ (контроль − бланк) × 100
- образец
- среднее поглощение обработанной группы
- контроль
- необработанная опора, принятая за 100 процентов
- бланк
- среда плюс реагент, без клеток; вычитаемый фон
- IC50
- интерполирована по логарифмической шкале между двумя дозами вокруг 50 процентов
Разобранный пример
Обработанная группа против необработанного контроля
- среднее контроля 1,00
- среднее обработки 0,525
- бланк 0,05
- Вычесть бланк: 0,525 минус 0,05 — это 0,475; 1,00 минус 0,05 — это 0,95.
- Разделить: 0,475 на 0,95 — это 0,50.
- В процентах: 50.
Ответ 50 процентов жизнеспособности относительно контроля
Частые ошибки
- Пропустить бланк. Формазан ложится на фон от среды, феноловый красный и планшет; без вычитания слабосигнальные лунки читаются завышенно.
- Читать IC50 с кривой, которая не доходит до половины. Если жизнеспособность держится выше пятидесяти во всём диапазоне, интерполировать IC50 нечего; расширьте дозы, а не экстраполируйте.
- Сравнивать планшеты, считанные в разное время или на разной длине волны. Развитие формазана и длина волны сдвигают абсолютные значения; держите контроль на каждом планшете.
Частые вопросы
IC50 — это подгонка кривой?
Нет. Это прямая интерполяция между двумя охватывающими точками по логарифму дозы. Для значения уровня публикации подгоните четырёхпараметрическую модель ко всем точкам.
Сколько повторностей?
Достаточно, чтобы видеть разброс; три технические лунки на группу — обычный минимум, и инструмент сообщает стандартное отклонение для оценки.
Годится ли для других тетразолиевых тестов?
Да. MTS, XTT и WST используют ту же арифметику поглощение-жизнеспособность; различается лишь работа с реагентом.